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EMU: AQUISIÇÃO DE SISTEMA COM PLATAFORMA PARA MICRODISSECÇÃO POR CAPTURA A LASER APLICADA EM ESTUDOS DE BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR

Projeto FAPESP 2009/53998-3

Breve histórico do MCL

A microdissecção por captura a laser (MCL) é um método prático para isolamento rápido e eficiente de populações celulares específicas, livre de contaminantes e passível de uma variedade de análises moleculares (Curran et al., 2000).Esta tecnologia, desenvolvida no início de 1990, depende da ativação a laser de um filme polimérico que se torna focalmente adesivo. Quando este filme é posto sob um tecido desidratado, a zona de adesão permite uma dissecção precisa de grupos celulares em um determinado tecido (Emmert-Buck et al., 1996).Em conjunto com técnicas analíticas de alta sensibilidade, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), a microdissecção permite uma precisa avaliação in vivo de populações celulares muitas vezes inacessíveis por estudos moleculares convencionais. Dependendo do material inicial, tanto DNA, mRNA de boa qualidade e proteínas podem ser extraídos, com sucesso, de fragmentos de tecidos capturados até o nível de uma única célula (Fend eRaffeld, 2000). 

Aplicações

A Microdissecção a Laser, também conhecida como MCL ,LCM (Laser Capture Microdissection) ou LMD (Laser Microdissection) é um método livre de contato e de contaminação para isolamento de células ou regiões específicas de um tecido de uma grande variedade de amostras.  A coleta por gravidade evita contato e contaminação. O sistema LMD faz com que seja possível fazer a distinção entre as células ou tecidos relevantes e irrelevantes, permitindo obter amostras ultra puras e homogêneas, a partir de material inicialmente heterogênea. O propósito consiste em analisar seletivamente e rotineiramente desde regiões de interesse até células individuais de todos os tipos de tecidos, inclusive células vivas de cultura de células, para obter resultados que sejam relevantes, reprodutíveis e específicas. O material dissecado é utilizado posteriormente em análises moleculares como PCR, PCR em tempo real, para análise proteômica e outras técnicas analíticas. A microdissecção a laser tem sido aplicada em diversas áreas da pesquisa como patologia, fisiologia, em pesquisas forenses, farmacêutica, câncer, clínicas e ambientais. Este método também é utilizado para a manipulação de culturas celulares.

FAPESP-EMU: Programa Equipamento Multiusuário

Nosso laboratório conta com o avançado sistema LeicaMCL7000 que possui um laser de alta potência com opções adicionais para ajuste de frequência de pulso e corrente para dissecção de tecidos que ofereçam maior resistência como tecidos ósseos e dentários e tecidos vegetais.O equipamento multiusuário concedido pela FAPESP-EMU, modelo LeicaMCL7000, oferece um sistema de microdissecção a laser de configuração livre, baseado em um microscópio dotado de um sistema vertical de alta-resolução. Em adição às avançadas funções de um microscópio de pesquisas totalmente automatizado, o sistema permite o isolamento e a manipulação de amostras microscópicas de forma completamente livre de contato e contaminação. A configuração do laser pode ser perfeitamente ajustável, de acordo com as necessidades do estudo e a aplicação desejada.
Para o preparo de amostras biológicas a partir de tecidos frescos com o objetivo de preservar ao máximo o material de estudo (e.g. proteínas, ácidos nucleicos tais como DNA e RNA, lipídeos e etc.), o laboratório conta também com um criostato (Leica CM1850). Desta forma, o tecido pode ser fixado em uma matriz crioprotetora, congelado rapidamente e seccionado, utilizando-se um micrótomo de alta precisão, acoplado à câmara de congelamento.

Referências

    Curran S., McKay J.A., McLeod H. L., MURRAY G.I. Laser capture microscopy. Journal of Clinical Pathology Molecular Pathology, v. 53, p. 64–68, 2000.
    Emmert-BuckM.R., Bonner R.F., Smith P.D.,Chuqui R.F.,Zhuang Z., Goldstein S.R., Weiss R. A.,Liotta L.A. Laser capture microdissection. Science,     v. 274, p. 998–1001, 1996.
    Fend F., Raffeld M. Laser capture microdissection in pathology. Journal of Clinical Pathology, v. 53, p. 666–672, 2000.


Descrição do Equipamento

Especificações:             LeicaLMD7000
Max. pulso energia:      120 µJ
Frequência pulso:         10-5000 Hz
Comprimento onda:      349 nm		multi1     multi2     multi2

http://www.leica-microsystems.com/products/light-microscopes/life-science-research/laser-microdissection/details/product/leica-lmd7000/downloads/
http://www.unige.ch/medecine/bioimaging/equipment/microscopes/protocoles.pdf
http://www.meyerinst.com/html/leica/lmd7000/lmd7000.pdf


multi4

CRIOSTATO

http://www.leicabiosystems.com/specimen-preparation/sectioning/cryosectioning/details/product/leica-cm1850/application/
http://www.leicabiosystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20CM1850/Brochures/Leica_CM1850_Brochure_EN.pdf





Exigências para utilização do Equipamento Multiusuário MCL

O solicitante deverá contatar o laboratório para apresentar sua proposta do uso do EMU-MCL. Para iniciantes, haverá disponibilidade de treinamento prévio pela equipe do laboratório.

Comitê Gestor

Comitê Gestor

1) Profa. Dra. Adriana Pinheiro Martinelli
Centro de Energia Nuclear na Agricultura – CENA/USP

2) Prof. Dr. Ricardo Della Coletta
Faculdade de Odontologia de Piracicaba –FOP/UNICAMP

3) Marcelo Carnier Dornelas
Instituto de Biologia, UNICAMP


Comitê Usuário

Comitê Usuário

1) Prof. Dr. Marcio Alves Ferreira
Departamento de Genética, Instituto de Biologia, UFRJ;

2) Prof. Dr. Elliot Watanabe Kitajima
NAP/MEPA, ESALQ/USP;

3) Maria Helena de Souza Goldman
Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Departamento de Biologia, USP.

Projetos Associados

Projetos Associados

Florescimento e frutificação em laranjeira Valência : aspectos anatômicos, fisiológicos , bioquímicos e moleculares.
Marcelo Carnier Dornelas
UNICAMP

Caracterização de genes preferencialmente expressos no estigma/estilete de Nicotiana tabacum, identificados por macroarray e SSH.
Maria Helena de Souza Goldman
USP

Monitoring the microbial diversity and functional activities in response to land-use changes and deforestation under soybean and sugarcane cultivations.
Siu Mui Tsai
CENA/USP 


Projetos Complementares

The role of MADS box and TCP transcription factors in the development of fleshy fruits.
Adriana Pinheiro Martinelli
CENA/USP

Produção de híbridos interespecíficos e intergenéricos de bromélias da Mata Atlântica com potencial ornamental.
Adriana Pinheiro Martinelli
CENA/USP

Análise da participação da produção endógena de ácidos graxos nos mecanismos de apoptose, metástase e vasculogênese em melanoma.
Edgard Graner
UNICAMP

Manejo da Leprose dos citros.
Elliot Watanabe Kitajima
ESALQ/USP

Functional Genomics of Photosynthetic Genes of Sugarcane.
Helaine Carrer
CEBTEC-ESALQ/USP

Functional omics of the ratoon stunting disease of sugarcane.
Luis Eduardo Aranha Camargo
ESALQ/;USP

Análise do padrão de expressão de genes da família MADS-box durante o desenvolvimento reprodutivo em Passiflora.
Marcelo Carnier Dornelas
UNICAMP

Caracterização de genes de função desconhecida preferencialmente expressos durante o desenvolvimento reprodutivo em cana-de-açúcar. (saccharum spp.)
Marcelo Carnier Dornelas
UNICAMP

Controle molecular do desenvolvimento dos órgãos reprodutivos.
Marcelo Carnier Dornelas
UNICAMP

Genômica funcional do café e do algodão: minerando promotores e genes importantes para estresses abiótico e biótico.
Marcio Alves Ferreira
UFRJ

Control of lignin biosynthesis in sugar cane:
Paulo Mazzafera
UNICAMP

Comparação Mofológica, proliferativa e da Síntese de Colágeno e Metaloproteinases de Matriz entre Fibroblastos e Miofibroblastos do estroma de Carcinomas Espinocelulares Orais.
Ricardo Della Coletta
UNICAMP

Estrutura, ultra-estrutura e citoquímica dos estratos parietais da antera e dos andrófitos em três espécies do gênero Miconia (Melastomataceae) com diferentes sistemas reprodutivos.
Sandra Maria Carmello Guerreiro
UNICAMP

Desenvolvimento anatômico de frutos e sementes de Passiflora suberosa L.(Passofloraceae).
Sandra Maria Carmello Guerreiro
UNICAMP

Anatomia e Micromorfologia do fruto e da semente de Pachira aquática Aubl.Bombacaceae.
Sandra Maria Carmello Guerreiro
UNICAMP

Embriologia em espécies de Miconia (Melastomataceae) com diferentes sistemas.
Reprodutivos
Sandra Maria Carmello Guerreiro
UNICAMP

Defeitos na formação do órgão dental.
Sergio Roberto Peres Line
UNICAMP

Identificação de genes do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) envolvidos na resistência a estresse biótico (Colletotrichum lindemuthianum) e abiótico (seca).
Siu Mui Tsai
CENA/USP

Genômica funcional e controle genético da reprodução vegetal por apomixia e sexualidade com perspectivas biotecnológicas.
Vera Tavares de Campos Carneiro